Водорода убива раковите клетки в белия дроб

Потискането на автофагията улеснява апоптозата на белодробните ракови клетки, медиирани от водород

Публикувано онлайн 2020 г., 12 август.  Линк към оригиналния текст – Doi:  10.3892/ol.2020.11973

Резюме

Предишното ни проучване установи, че водородният газ (H 2 ) може ефективно да инхибира прогресията на белодробния рак; основните механизми обаче все още предстои да бъдат изяснени. Настоящото изследване има за цел да изследва ролята на H 2 в автофагията на белодробен рак и да разкрие ефектите на автофагията върху H 2-посредствена апоптоза на рак на белия дроб и основните механизми. Нивата на експресия на протеини, свързани с клетъчна апоптоза и автофагия, бяха открити с помощта на Western blot анализ. Клетъчната автофагия се инхибира чрез лечение с 3-метиладенин или понижаване на Beclin1, докато рапамицин се използва за индуциране на автофагия. Клетъчният растеж и апоптозата бяха открити, като се използва комплект за преброяване на клетки-8 и тестове за цитометрия, съответно. Резултатите показват, че клетъчна апоптоза и автофагия са значително подобрени в А549 и H1975 белодробни ракови клетъчни линии, третирани с Н 2 . Въпреки това, автофагия повишаване отслабена Н 2 роли в насърчаването на клетъчна апоптоза и обратно. Освен това беше установено, че H 2лечение индуцирания маркиран понижение на нивата на протеин експресиране на фосфорилиран STAT3 и Bcl-2, и свръхекспресия на STAT3 премахнати Н 2 роли в насърчаването на клетъчна апоптоза и автофагия. Като цяло, настоящото изследване показва, че Н 2 може да стимулира клетъчен рак на белия дроб и апоптоза автофагия чрез инхибиране на активиране на STAT3 / Bcl-2 сигнализиране и потискане на автофагия може да подобри H 2 роли в насърчаването на рак на белия дроб клетъчна апоптоза.

Ключови думи: водороден газ, клетъчна апоптоза, клетъчна автофагия, STAT/Bcl2 сигнализиране

Въведение

Водородният газ (H 2 ), като вид ендогенен газ, е доказано, че не само служи като решаващ източник на енергия, но и играе решаваща роля във физиологичната регулация (  ). Молекулите на водорода могат да влязат в тъканите и да упражняват противовъзпалителни, антиоксидантни и антиапоптотични роли (  ). По -специално, H 2 показва висока безопасност и ефикасност за пациентите в клинични условия (  ). Интравенозното приложение на 500 мл Н 2значително подобри еритема и свързаните с него симптоми при 4 пациенти с остри еритематозни кожни заболявания, без промени във физиологичните параметри, като телесна температура, кръвно налягане и пулс или влошаване на чернодробната и бъбречната функция. В допълнение, двама доброволци (единият за интравенозно приложение на H 2, а другият за инхалация на H 2 ) не демонстрираха дискомфорт (  ). Напоследък H 2 се прилага и в клинични условия за подобряване на загубата на слуха, предизвикана от лъчетерапия при пациенти с рак на назофаринкса ( идентификатор ClinicalTrials.gov , NCT03818347 ) (  ). В това проучване, H 2(67% водород и 33% кислород) се генерира с помощта на водород-кислородния пулверизатор чрез електролиза на вода и резултатите показват, че водород-кислородната терапия може значително да подобри бинауралния слух (  ). Друго проучване от Фаза 1 ( идентификатор на ClinicalTrials.gov , NCT04046211 ) има за цел да изследва безопасността на H 2 върху здрави възрастни доброволци. В проучването са включени 8 доброволци, 2 от които са били изложени на 2,4% H 2 във медицински въздух за 24 часа, 2, които са били изложени на същия газ в продължение на 48 часа, а останалите 4 пациенти са били изложени на същия газ в продължение на 72 часа ( https://clinicaltrials.gov/ct2/show/ NCT04046211 ). В допълнение, Dole et al ( ), предложен през 1975 г. за първи път, че H 2 има противораков потенциал. По същия начин, нашите изследвания група предварително установено, че Н 2 приложение значително потиска растежа на клетките, капацитет миграция и инвазия и индуцираната клетъчна апоптоза в белодробен рак А549 и H1975 клетки (  ). Въпреки това, молекулярните механизми остават до голяма степен неизвестни.

Автофагията и апоптозата са незаменими биологични процеси и играят решаваща роля в индивидуалното развитие (  ). Автофагията, известна още като макроавтофагия, е процес на „самоизяждане“, който поглъща цитоплазмени протеини, комплекси или органели в автофагозомата (цитоплазмена двойна мембранна структура), водеща до разграждане и рециклиране (  ). Автофагията се модулира от свързани с автофагия гени (ATGs) чрез две еволюционно запазени убиквитиноподобни конюгационни системи, известни като ATG12-ATG5 и ATG8 система с лека верига 3 (LC3) -фосфатидилетаноламин (PE). Свързаният с микротубули протеин 1A/1B LC3BI е конюгиран с РЕ, за да стане LC3BII, който се свързва с външните и вътрешните мембрани на автофагозомата ( ). Известно е, че автофагията поддържа клетъчната хомеостаза и предпазва от различни заболявания, включително рак (  –  ). Неговата роля в канцерогенезата обаче е спорна. Натрупването на доказателства е установило, че автофагията е „двуостър меч“ в прогресията на рака (  ,  ).

Сигнален трансдюсер и активатор на транскрипция (STAT) 3 е латентен транскрипционен фактор, който модулира извънклетъчните сигнали чрез взаимодействие с полипептидни рецептори (  ). STAT3 протеинът се активира транскрипционно предимно чрез фосфорилиране на тирозин, което след това се димеризира, транслокира към ядрото и се свързва със специфични за последователността ДНК елементи, което води до транскрипция на целеви гени (  ). Установено е, че STAT3 служи като онкоген и често хипер-активиран при редица видове рак, включително рак на белия дроб, допринасящ за оцеляването, пролиферацията, метастазите и ангиогенезата на раковите клетки (  ,  ). В допълнение, STAT3 играе жизненоважна роля в процеса на автофагия ( ). Например, Guo et al (  ) съобщават, че потискането на STAT3 чрез неговия инхибитор, изокриптотаншинон засилва аутофагията в клетъчната линия на рак на белия дроб A549.

Настоящото изследване има за цел да изследва ефектите на H 2 върху аутофагията и апоптозата в белодробните ракови клетки и ролята на STAT3 в този процес. Резултатите показват, че Н 2 може да насърчи рак на белия дроб клетъчна апоптоза и автофагия чрез инхибиране на активиране на STAT3 / BCL2 сигналния път и потискане на автофагия може да подобри H 2 роли в насърчаването на рак на белия дроб клетъчна апоптоза.

Материали и методи

Клетъчни линии и култура

Клетъчните линии на човешки A549 и H1975 рак на белия дроб са закупени от American Type Culture Collection. Клетъчната линия A549 се култивира в среда F-12K, допълнена с 10% фетален говежди серум (FBS), докато клетъчната линия H1975 се култивира в среда RPMI-1640, съдържаща 10% FBS (всички от Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc. ). Две клетъчни линии се държат в инкубатор при 37 ° С с 5% СО 2 .

 

Клетъчна трансфекция и лечение

Три къси интерфериращи (si) РНК, използвани за заглушаване на Beclin1 (si-Beclin1-1/2-3; кат. № SR322490) в клетките A549 и H1975, и вектора на отрицателната контрола (si-NC, кат. № SR322490 ) са закупени от OriGene Technologies, Inc. използвайки реагента за трансфекция Lipofectamine ®2000 (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) съгласно протоколите на производителя с 2 µg OE-STAT3/OE-NC или 0,3 µg si-Beclin1/si-NC за всяка ямка от 6-ямкова плака. След 48 часа трансфекция, клетките бяха събрани за анализ. СиРНК последователностите бяха както следва: si-NC, напред: 5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3 ′ и обратно: 5′-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3 ′; si-Beclin1-1, напред: 5′-CUGGACACGAGUUUCAAGATT-3 ′ и обратно: 5′-UCUUGAAACUCGUGUCCAGTT-3 ′; si-Beclin1-2, напред: 5′-GUGGAAUGGAAUGAGAUUATT-3 ′ и обратно: 5′-UAAUCUCAUUCCAUUCCACTT-3 ′; si-Beclin1-3, напред: 5′-GCUGCCGUUAUACUGUUCUTT-3 ′ и обратно: 5′-AGAACAGUAUAACGGCAGCTT-3 ′.

За лечение с H 2 , клетките A549 и H1975 се култивират в различни концентрации на H 2 (20, 40 и 60%) с помощта на Shanghai Nanobubble Technology Co., Ltd. ( http://www.nanobubble.cn/p- about.html? app = mb ) за различни времеви точки (12, 24, 36, 48 или 72 h) и 5% CO 2 служи като отрицателна контрола.

А549 и Н1975 клетките бяха третирани с 2 тМ 3-метиладенин (3-МА) или 100 цМ рапамицин (RAPA) за 48 часа, за да потиснат и индуцират съответно автофагия.

 

Western blot анализ

Общият протеин се екстрахира от клетките с помощта на буфер за лизис на RIPA (Sangon Biotech Co., Ltd.), съдържащ протеазен инхибитор (Beyotime Institute of Biotechnology) и съгласно инструкциите на производителя. След количествено определяне с набор от протеини на бицинхонинова киселина (Bio-Rad Laboratories, Inc.), 30 µg протеин от всяка проба се зарежда на лента и се отделя, използвайки 10% SDS-PAGE. След това протеините се прехвърлят върху мембрани от поливинилиден дифлуорид (EMD Millipore) и се блокират с 5% обезмаслено мляко при стайна температура за 1 час, след което мембраните се инкубират със следните първични антитела, за една нощ при 4 ° C: разцепена каспаза 3 (разреждане 1: 1000; кат. № ab2302; Abcam), разцепена поли ADP-рибоза полимераза (PARP; 1: 1000 разреждане; кат. № ab32064; Abcam), Beclin1 (разреждане 1: 2000; кат. № ab207612; Abcam), p62 (разреждане 1: 1000; кат. № ab56416; Abcam), LC3B (разреждане 1: 3 000; кат. № ab51520; Abcam), Bcl2 (разреждане 1: 1000; кат. № 15071; Технология за клетъчна сигнализация, Inc. .), STAT3 (разреждане 1: 1000; кат. № 9139; Cell Signaling Technology, Inc.), фосфорилиран (р) -STAT3 (разреждане 1: 1000; кат. № 9145; Cell Signaling Technology, Inc.) и β-актин (1: 4,000 разреждане; кат. № 3700; Cell Signaling Technology, Inc.). След инкубацията със съответните вторични антитела (Santa Cruz Biotechnology, Inc.), нивата на експресия на протеин се откриват с помощта на Western blot образна и количествена система (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Количественото определяне на протеините се извършва с помощта на софтуера ImageJ (версия 1.48; Национални здравни институти) след изваждане на фона, с β-актин като вътрешна справка. Abcam), LC3B (1: 3 000 разреждане; кат. № ab51520; Abcam), Bcl2 (1: 1 000 разреждане; кат. № 15071; Cell Signaling Technology, Inc.), STAT3 (1: 1 000 разреждане; кат. Не 9139; Cell Signaling Technology, Inc.), фосфорилиран (р) -STAT3 (разреждане 1: 1000; кат. № 9145; Cell Signaling Technology, Inc.) и β-актин (разреждане 1: 4 000; кат. 3700; Cell Signaling Technology, Inc.). След инкубацията със съответните вторични антитела (Santa Cruz Biotechnology, Inc.), нивата на експресия на протеин се откриват с помощта на Western blot образна и количествена система (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Количественото определяне на протеините се извършва с помощта на софтуера ImageJ (версия 1.48; Национални здравни институти) след изваждане на фона, с β-актин като вътрешна справка. Abcam), LC3B (1: 3 000 разреждане; кат. № ab51520; Abcam), Bcl2 (1: 1 000 разреждане; кат. № 15071; Cell Signaling Technology, Inc.), STAT3 (1: 1 000 разреждане; кат. Не 9139; Cell Signaling Technology, Inc.), фосфорилиран (р) -STAT3 (1: 1000 разреждане; кат. № 9145; Cell Signaling Technology, Inc.) и β-актин (1: 4,000 разреждане; кат. No. 3700; Cell Signaling Technology, Inc.). След инкубацията със съответните вторични антитела (Santa Cruz Biotechnology, Inc.), нивата на експресия на протеин се откриват с помощта на Western blot образна и количествена система (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Количественото определяне на протеините се извършва с помощта на софтуера ImageJ (версия 1.48; Национални здравни институти) след изваждане на фона, с β-актин като вътрешна справка. 000 разреждане; котка не. 15071; Cell Signaling Technology, Inc.), STAT3 (разреждане 1: 1000; кат. № 9139; Cell Signaling Technology, Inc.), фосфорилиран (р) -STAT3 (разреждане 1: 1000; кат. № 9145; Технология за клетъчна сигнализация , Inc.) и β-актин (разреждане 1: 4 000; кат. № 3700; Cell Signaling Technology, Inc.). След инкубацията със съответните вторични антитела (Santa Cruz Biotechnology, Inc.), нивата на експресия на протеин се откриват с помощта на Western blot образна и количествена система (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Количественото определяне на протеините се извършва с помощта на софтуера ImageJ (версия 1.48; Национални здравни институти) след изваждане на фона, с β-актин като вътрешна справка. 000 разреждане; котка не. 15071; Cell Signaling Technology, Inc.), STAT3 (разреждане 1: 1000; кат. № 9139; Cell Signaling Technology, Inc.), фосфорилиран (р) -STAT3 (разреждане 1: 1000; кат. № 9145; Технология за клетъчна сигнализация , Inc.) и β-актин (разреждане 1: 4 000; кат. № 3700; Cell Signaling Technology, Inc.). След инкубацията със съответните вторични антитела (Santa Cruz Biotechnology, Inc.), нивата на експресия на протеин се откриват с помощта на Western blot образна и количествена система (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Количественото определяне на протеините се извършва с помощта на софтуера ImageJ (версия 1.48; Национални здравни институти) след изваждане на фона, с β-актин като вътрешна справка. фосфорилиран (р) -STAT3 (1: 1000 разреждане; кат. № 9145; Cell Signaling Technology, Inc.) и β-актин (1: 4 000 разреждане; кат. № 3700; Cell Signaling Technology, Inc.). След инкубацията със съответните вторични антитела (Santa Cruz Biotechnology, Inc.), нивата на експресия на протеин се откриват с помощта на Western blot образна и количествена система (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Количественото определяне на протеините се извършва с помощта на софтуера ImageJ (версия 1.48; Национални здравни институти) след изваждане на фона, с β-актин като вътрешна справка. фосфорилиран (р) -STAT3 (1: 1000 разреждане; кат. № 9145; Cell Signaling Technology, Inc.) и β-актин (1: 4 000 разреждане; кат. № 3700; Cell Signaling Technology, Inc.). След инкубацията със съответните вторични антитела (Santa Cruz Biotechnology, Inc.), нивата на експресия на протеин се откриват с помощта на Western blot образна и количествена система (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Количественото определяне на протеините се извършва с помощта на софтуера ImageJ (версия 1.48; Национални здравни институти) след изваждане на фона, с β-актин като вътрешна справка. нивата на експресия на протеин са открити с помощта на Western blot образна и количествена система (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Количественото определяне на протеините се извършва с помощта на софтуера ImageJ (версия 1.48; Национални здравни институти) след изваждане на фона, с β-актин като вътрешна справка. нивата на експресия на протеин са открити с помощта на Western blot образна и количествена система (Bio-Rad Laboratories, Inc.). Количественото определяне на протеините се извършва с помощта на софтуера ImageJ (версия 1.48; Национални здравни институти) след изваждане на фона, с β-актин като вътрешна справка.

Анализ на комплект-8 за преброяване на клетки (CCK-8)

Използва се анализ на CCK-8 за определяне на способността за клетъчна пролиферация съгласно инструкциите на производителя. Накратко, А549 и H1975 клетки бяха култивирани в 96-ямкови плаки при плътност от 2 х 10 3 клетки / ямка, за една нощ при 37 ° С. След това, клетките бяха третирани с различни концентрации на Н 2 за 12, 24, 36, 48 или 72 часа. След това средата за клетъчна култура се замества с 10 µl реагент CCK-8 (Институт по биотехнология на Beyotime) и 90 µl прясна среда и се инкубира при 37 ° С за още 4 часа. Абсорбцията при 450 nm се определя с помощта на четец на плаки (модел 680; Bio-Rad Laboratories, Inc.).

 

Анализ на поточна цитометрия

Клетъчната апоптоза се определя с помощта на поточна цитометрия и комплект от анексин V-FITC/пропидиев йодид (PI) (Thermo Fisher Scientific, Inc.) в съответствие с протоколите на производителя. Накратко, А549 и H1975 клетки се събират чрез центрофугиране при 110 х г в продължение на 5 минути при 4 ° С и се промиват веднъж с PBS след 48 часа от Н 2 лечение и / или клетъчна трансфекция. След това клетките се инкубират с разтвор на анексин V-FITC и PI в продължение на 15 минути на тъмно, при стайна температура. Флуоресцентните сигнали бяха оценени с помощта на поточна цитометрия (BD Biosciences) в рамките на 1 час след оцветяване, използвайки софтуер Flowjo версия 7.6 (FlowJo LLC). Клетките в квадранта на FITC  /PI  представляват живи клетки, докато FITC + /PI представлява ранни апоптотични клетки и FITC + /PI + представлява късни апоптотични клетки.

 

Статистически анализ

Всеки експеримент се извършва в три екземпляра. Данните са представени средно ± стандартно отклонение. Статистически значими сравнения между две групи и множество групи бяха извършени с помощта на неспарен t-тест на Student и еднопосочен ANOVA, последван от post hoc тест на Dunnett или Tukey. Анализът на данните беше извършен с помощта на софтуера SPSS (версия 23.0, IBM Corp.). Счита се, че Р <0,05 показва статистически значима разлика.

Резултати

Лечението с водород предизвиква значително повишаване на клетъчна апоптоза и автофагия

Настоящото изследване първо изследва ефектите от лечението с Н 2 върху апоптозата и автофагията на белодробните ракови клетки. В сравнение с това в контролната група, клетъчната жизнеспособност се редуцира след третиране с Н 2 , във време-зависим начин, и в двата А549 и H1975 клетки (Фиг. 1А), заедно с повишени проценти на апоптоза (Фиг. 1В и С). Нивата на експресия на про-апоптични протеини, включително разцепена каспаза-3 и разцепен PARP-значително увеличени последвано Н 2 лечение в сравнение с това в контролната група (Фиг. 1D и Е), в зависимост от дозата, и в двете клетъчни линии. В допълнение, експресията Beclin1 и съотношението на LC3BII / I са също така значително увеличава след Н 2 лечение, докато експресията на P62 е значително намалена (Фиг. 1D и Е), също в зависимост от дозата. Тези резултати показват, че Н 2 може да индуцира клетъчна апоптоза и автофагия в белодробни ракови клетъчни линии.

Външен файл, който съдържа картина, илюстрация и др. Името на обекта е ol-20-04-11973-g00.jpg

Лечението с Н 2 повишава апоптозата и автофагията на белодробния рак. След А549 и H1975 клетки бяха третирани с 20, 40 или 60% Н 2 , се извършват следните анализи. (А) За изследване на клетъчния растеж беше използван анализ на клетъчно преброяване Kit-8. (В и В) Анализ на поточна цитометрия беше използван за откриване на клетъчна апоптоза. (D и E) Нивата на протеини на разцепена-каспаза 3, разцепена-PARP, p62, Beclin1, LC3BII и LC3BI бяха открити с помощта на Western blot анализ. *P <0,05 и ** P <0,01 спрямо контролата. PARP, поли ADP-рибоза полимераза; LC3, лека верига 3; Н 2 , водороден газ.

 

Автофагия отслабва ролята на Н 2 за насърчаване на клетъчна апоптоза в белодробни ракови клетки

Впоследствие се изследват ролята на автофагията в индуцирана от Н 2 клетъчна апоптоза в белодробни ракови клетки. Нивата на експресия на протеин на Beclin1 и LC3BII/I бяха значително повишени, докато това на p62 беше намалено, когато клетките A549 и H1975 бяха третирани с RAPA, индуктор на автофагия (Фиг. 2А). 60% Н 2 доведе до значителни промени в клетъчната жизнеспособност и апоптоза, 60% Н 2 се избира за следващите експерименти. След лечение с RAPA, скоростта на клетъчна апоптоза (Фиг. 2В) и нивата на експресия на протеин на разцепена-каспаза 3 и разцепена-PARP (Фиг. 2C и D) са значително намалени в сравнение с тези в H 2 групата. Обратно, нивата на експресия на протеин на Beclin1 и LC3BII/I бяха значително намалени и експресията на р62 беше увеличена след клетъчно третиране с 3-МА, репресор за автофагия (Фиг. 2Е). В допълнение, лечението с 3 -МА повишава Н2 -медиираното увеличаване на скоростта на клетъчната апоптоза (Фиг. 2F) и нивата на експресия на протеин на разцепена каспаза 3 и разцепен-PARP в сравнение с H 2 групата (Фиг. 2G и H). Тези резултати разкриват, че автофагията отслабва ролята на Н 2 в индуцирането на клетъчна апоптоза в белодробните ракови клетки.

Външен файл, който съдържа картина, илюстрация и т.н. Името на обекта е ol-20-04-11973-g01.jpg

Оценка на автофагия ефекти върху Н 2 индуцирана белодробна ракова клетъчна апоптоза. (А) Нивата на експресия на протеин на p62, Beclin1, LC3BII и LC3BI, след третиране на клетки A549 и H1975 с RAPA бяха открити с помощта на Western blot анализ. (В) Клетъчната апоптоза се изследва с помощта на анализ на поточна цитометрия. Western блот анализ на експресията на срязания каспаза 3 и срязания PARP в (С), А549 и (D) H1975 клетки, третирани с Н 2 или Н 2+RAPA. (Е) Нивата на експресия на протеин на p62, Beclin1, LC3BII и LC3BI бяха открити с помощта на Western blot анализ след третиране на клетки A549 и H1975 с 3-МА. (F) Клетъчната апоптоза е изследвана с помощта на поточна цитометрия. Western блот анализ на нивата на експресия на протеин се разцепва-каспаза 3 и срязания PARP след лечение на (G) и А549 (Н) H1975 клетки с Н 2 или Н 2 + 3-MA. *Р <0,05. ** P <0,01. LC3, лека верига 3; RAPA, рапамицин; PARP, поли ADP-рибоза полимераза; PI, пропидиев йодид; 3-МА, 3-метиладенин; Н 2 , водороден газ.

 

Разрушаване на Beclin1 повишава ролята на Н 2 за насърчаване на клетъчна апоптоза в ракови клетъчни линии на белодробен

За по-нататъшно изясняване на ролята на автофагия в Н 2 медиирана рак на белия дроб клетъчна апоптоза, са проведени експерименти разрушаване. Експресията на Beclin1 е значително намалена в A549 и H1975 клетки, трансфектирани със siRNAs, насочени към човешкия Beclin1 ген. Тъй като si-Beclin1-3 значително намалява нивото на експресия на протеин на Beclin1 сред трите siRNAs (Фиг. 3А), това беше избрано за следващите експерименти. След клетъчна трансфекция със si-Beclin1-3, нивото на експресия на протеин на р62 се повишава и съотношението на експресия на LC3BII: LC3BI се намалява (Фиг. 3В и С). За отбелязване е, клетъчна апоптоза, индуцирана от Н 2 лечение значително се увеличава, когато Beclin1 е спрян в двете А549 и H1975 клетки, в сравнение с Н 2 група (Фиг. 3D). В допълнение, разрушаване на Beclin1 повишена протеин експресионни нива на срязания каспаза 3 и срязания PARP в А549 и H1975 клетки следните Н 2 лечение в сравнение с клетки, третирани с Н 2 само (Фиг. 3Е и F). Тези резултати потвърждават, че инхибирането автофагия може да засили ефекта на Н 2 за индуциране на клетъчна апоптоза в белодробни ракови клетъчни линии.

Външен файл, който съдържа картина, илюстрация и т.н. Името на обекта е ol-20-04-11973-g02.jpg

Нокдаун на Beclin1 засилва ролята на Н 2 за насърчаване на рак на белия дроб клетъчна апоптоза. (А) Ефективността на нокдаун на si-Beclin1 в клетки A549 и H1975 се открива с помощта на Western blot анализ. (В) Western blot анализ беше използван за откриване на нивата на експресия на протеин на р62, LC3BII и LC3BI в клетки A549 и H1975 и резултатите впоследствие бяха (С) количествено определени. (D) Анализ на поточна цитометрия беше използван за изследване на клетъчна апоптоза. Нивата на експресия на протеин на разцепена каспаза 3 и разцепен-PARP се определят с помощта на Western blot анализ в (Е) А549 и (F) Н1975 клетки. *P <0,05 и ** P <0,01. si, кратка намеса; LC3, лека верига 3; PARP, поли ADP-рибоза полимераза; PI, пропидиев йодид; Н 2 , водороден газ.

 

Лечението с H 2 индуцира апоптоза и аутофагия на белодробни ракови клетки чрез потискане на сигналния път STAT3/Bcl2

След това, ролята на сигнализация път STAT3 / Bcl-2 в Н 2 медиирана клетъчна апоптоза и автофагия в рак на белия дроб клетъчни линии са изследвани. Нивата на експресия на протеин на p-STAT3 и Bcl2 бяха значително намалени след третиране с H 2 в клетки H1975 и A549 по дозозависим начин (Фиг. 4А и В), докато свръхекспресията на STAT3 премахна този ефект (Фиг. 4C-E). В допълнение, свръхекспресия на STAT3 в Н 2 лекувани клетки инхибира белодробен рак клетъчна апоптоза и неутрализирани Н 2 медиирани повишаване на апоптоза (Фиг. 4F и G), Заедно с намалява нивата на експресия на срязания каспаза 3 протеини, срязания PARP, Beclin1, LC3BII / I и повишената експресия на P62 (всички срещу H 2 група;Фиг. 4H и I). Гореспоменатите констатации предполагат, че лечението с Н 2 стимулира апоптозата и автофагията на рака на белия дроб чрез потискане на активирането на сигналния път STAT3/Bcl2.

Външен файл, който съдържа картина, илюстрация и т.н. Името на обекта е ol-20-04-11973-g03.jpg

Лечението с Н 2 увеличава апоптозата и автофагията на белодробния рак, като потиска активирането на сигналния път STAT3/Bcl2. Нивата на експресия на протеин STAT3, р-STAT3 и Bcl-2 са открити с помощта на уестърн блот анализ в (А), А549 и (В) H1975 клетки след третиране с различни концентрации на Н 2 . (В) Експресията на STAT3 се открива с помощта на Western blot анализ след трансфекция с OE-STAT3 или OE-NC. Нивата на експресия на протеин STAT3, р-STAT3 и Bcl-2 са открити с помощта на уестърн блот анализ в (D), А549 и (Е) H1975 клетки след третиране с Н 2и/или трансфектиран с OE-STAT3. Клетъчната апоптоза се изследва с помощта на (F) поточна цитометрия и резултатите впоследствие се определят (G) количествено. Нивата на експресия на протеин на разцепена каспаза 3, разцепен-PARP, Beclin1, p62, LC3BII и LC3BI в (H) A549 и (I) H1975 клетки бяха открити с помощта на Western blot анализ след трансфекция с OE-STAT3 и/или третиран с H 2 . *P <0,05 и ** P <0,01. STAT, сигнален преобразувател и активатор на транскрипция; р-, фосфорилиран; PARP, поли ADP-рибоза полимераза; LC3, лека верига 3; Н 2 , водород газ; OE, свръхекспресия; NC, отрицателен контрол

Дискусия

Като безцветен, без мирис, без вкус, нетоксичен и силно запалим газ, H 2 играе множество роли, включително анти-реактивни кислородни видове, противовъзпалителни и антитуморни (  ). Все повече доказателства разкриват, че H 2 не само подобрява страничните ефекти, предизвикани от химиотерапевтиците, но също така инхибира растежа на рака (  –  ). В допълнение, Chen et al (  ) съобщават, че H 2лечението намалява размера на метастазите в коремната кухина, подобрява анемията и хипоалбуминемията и постепенно връща нормалните нива на лимфоцитите и туморните маркери, включително CA19-9, α фетопротеин и карциноембрионален антиген. В предишния проучване, беше установено, че Н 2 лечение ефективно инхибира растежа на рак на белия дроб клетка и индуцираната клетъчна апоптоза чрез насочване на структурната поддържането на хромозомите 3 ген в доза-зависим начин, без странични ефекти на не-туморен обременени мишки (  ). Настоящото изследване показва, че Н 2 лечение потиска растежа на клетките и повишена клетъчна апоптоза чрез инхибиране на STAT3 / Bcl-2 сигнален път в А549 и H1975 белодробни ракови клетъчни линии.

Автофагията и апоптозата, които водят до разграждане на протеини и органели или клетъчна смърт при клетъчен стрес, играят жизненоважна роля в прогресията на белодробния рак (  ). Предишни проучвания показват, че автофагията служи като „меч с две остриета“ при апоптоза на белодробен рак (  ). Обикновено потискането на автофагията намалява способността на клетката да преодолява стреса и да поддържа хомеостазата (  ). Няколко проучвания обаче съобщават, че автофагията предизвиква клетъчна апоптоза (  –  ). Автофагията играе онкогенна или туморно потискаща роля в канцерогенезата (  ). При рак на белия дроб инхибирането на автофагията повишава антиангиогенните свойства на анлотиниб ( ), което предполага ангиогенна роля на автофагията при рак на белия дроб. Yin et al (  ) съобщават, че инхибирането на автофагията, индуцирано от муколипин-1 (който е член на семейството на преходните рецепторни потенциални катионни канали), понижаващо регулирането потиска прогресията на белодробния рак. Li et al (  ), показват, че усилването на автофагията, причинено от апуринова ендонуклеаза 1, значително повишава устойчивостта на белодробните ракови клетки към цисплатин. Тези открития предполагат, че автофагията може да окаже онкогенна роля в прогресията на белодробния рак. За разлика от това, Fan et al (  ) съобщават, че Bruceine D, квазиноидно съединение, което може да бъде извлечено от семената на Brucea javanica, инхибира прогресията на белодробния рак чрез индуциране на клетъчна апоптоза и автофагия, което предполага потискаща роля на автофагията в прогресията на рака на белия дроб. Тези открития показват, че автофагията играе важна роля в прогресията на белодробния рак, поради което автофагията играе роля в индуцираната от Н 2 клетъчна апоптоза в клетъчните линии на рак на белия дроб.

Когато се индуцира автофагия, Beclin1 и LC3 се разпределят към мембраната на автофагозомата, за да предизвикат образуването на автофагозома, докато експресията на р62 намалява (  ,  ). Трансформацията на LC3I в LC3BII е най-често срещаният маркер за автофагозома, тъй като количеството LC3BII отразява броя на автофагозомите и свързаните с автофагия структури (  ). Настоящото изследване установи, че Н 2 лечение значително повишена експресия на протеиново ниво на Beclin1, и превръщането на LC3BI да LC3BII и намалява нивото на експресия на P62, което показва, че Н 2 лечение може да доведе до рак на белия дроб клетка автофагия. Няколко проучвания са изследвали ролята на H 2лечение при автофагия. По-подробно, Guan сътр (  ) съобщава, че Н 2 лечение индуцира автофагия и защитени Sprague-Dawley плъхове срещу хроничен интермитентен хипоксия-индуциран бъбречна дисфункция. В допълнение, вдишване 2% Н 2 доведе до увеличаване на експресията на LC3BII и атенюиран сепсис индуцирано увреждане на черния дроб (  ). Въпреки това, в миокарден реперфузия модел на исхемия на плъхове, Н 2 инхалация значително намалява размера и исхемична серум тропонин I ниво чрез потискане автофагия (  ). Ефектите могат да бъдат специфични за тъканите.

В допълнение, настоящото изследване също изследва ролята на автофагията в H 2 -медиирана клетъчна апоптоза. Резултатите показват, че автофагия аксесоар от RAPA стимулиране значително отслабен Н 2 медиирана клетъчна апоптоза в А549 както и H1975 белодробни ракови клетъчни линии, докато инхибиране автофагия чрез третиране 3-MA или миРНК-Beclin1 трансфекция значително подобрена ролите на Н 2 в насърчаването на белия дроб апоптоза на ракови клетки, което показва, че инхибирането на автофагията може да засили антитуморната роля на H 2 при рак на белия дроб.

Както сигнални пътя на STAT3 / Bcl-2 служи важна роля в клетъчната автофагия и апоптоза (  ,  ), настоящото изследване също изследва ефектите на STAT3 / Bcl-2 сигнален път на Н 2 медиирана белодробен рак клетка автофагия и апоптоза. Установено е, че експресионните нива на фосфорилиране на протеин на STAT3 и Bcl-2 бяха значително инхибирани, когато А549 и H1975 клетки се обработва с Н 2 , което предполага, че Н 2 може да потисне активирането на пътя на сигнализация STAT3 / Bcl-2. В съответствие с този резултат, Bai et al ( ) установи, че богатото на водород физиологично лечение увеличава нивата на експресия на LC3B и Beclin1 протеин и намалява нивото на протеиново фосфорилиране на STAT3 при хипоксично-исхемични мозъчно увредени мишки. За да се изследва ролята на STAT3 / Bcl-2 в Н 2 медиирана клетъчна апоптоза и автофагия в рак на белия дроб, спасителни експерименти бяха проведени в настоящото изследване. Резултатите показват, че свръхекспресията на STAT3 неутрализира Н 2 роля в повишаване на клетъчната автофагия и апоптоза, което предполага, че Н 2 индуциран рак на белия дроб и апоптоза автофагия чрез инхибиране на сигналния път на STAT3 / Bcl-2.

В заключение, настоящото изследване показва, че Н 2 може да насърчи рак на белия дроб клетъчна апоптоза и автофагия чрез инхибиране на STAT3 / Bcl-2 сигнален път и, че потискането на автофагия може да засили ролята на Н 2 за насърчаване на рак на белия дроб клетъчна апоптоза. Настоящото проучване може да осигури ново приложение на H 2 при лечението на рак на белия дроб.

Препратки

1. Zhao P, Jin Z, Chen Q, Yang T, Chen D, Meng J, Lu X, Gu Z, He Q. Локално генериране на водород за засилена фототермична терапия. Nat Commun. 2018 г .; 9 : 4241. doi: 10.1038/s41467-018-06630-2. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
2. Ohsawa I, Ishikawa M, Takahashi K, Watanabe M, Nishimaki K, Yamagata K, Katsura K, Katayama Y, Asoh S, Ohta S. Водородът действа като терапевтичен антиоксидант чрез селективно намаляване на цитотоксичните кислородни радикали. Nat Med. 2007 г .; 13 : 688–694. doi: 10.1038/nm1577. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
3. Ono H, Nishijima Y, Adachi N, Sakamoto M, Kudo Y, Nakazawa J, Kaneko K, Nakao A. Лечение с водород (H2) за остри ериматозни кожни заболявания. Доклад на 4 пациенти с данни за безопасност и неконтролирано проучване за осъществимост с измерване на концентрацията на Н2 върху двама доброволци. Med Gas Res. 2012 г .; 2 : 14. doi: 10.1186/2045-9912-2-14. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
4. Chen J, Kong X, Mu F, Lu T, Du D, Xu K. Водород-кислородната терапия може да облекчи индуцираната от лъчетерапия загуба на слуха при пациенти с рак на назофаринкса. Ann Palliat Med. 2019; 8 : 746–751. doi: 10.21037/apm.2019.11.18. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
5. Dole M, Wilson FR, Fife WP. Хипербарична водородна терапия: Възможно лечение за рак. Наука. 1975; 190 : 152–154. doi: 10.1126/наука.1166304. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
6. Wang D, Wang L, Zhang Y, Zhao Y, Chen G. Водородният газ инхибира прогресията на рака на белия дроб чрез насочване към SMC3. Biomed Pharmacother. 2018 г .; 104 : 788-797. doi: 10.1016/j.biopha.2018.05.055. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
7. Горди С, Той YW. Кръстосаните връзки между автофагия и апоптоза: докъде води това? Протеинови клетки. 2012 г .; 3 : 17–27. doi: 10.1007/s13238-011-1127-x. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
8. Levine B, Kroemer G. Автофагия в патогенезата на болестта. Клетка. 2008 г .; 132 : 27–42. doi: 10.1016/j.cell.2007.12.018. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
9. Sotthibundhu A, McDonagh K, von Kriegsheim A, Garcia-Munoz A, Klawiter A, Thompson K, Chauhan KD, Krawczyk J, McInerney V, Dockery P, et al. Рапамицин регулира автофагията и клетъчната адхезия в индуцирани плурипотентни стволови клетки. Стволови клетки Res Ther. 2016 г .; 7 : 166. doi: 10.1186/s13287-016-0425-x. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
10. Boya P, Reggiori F, Codogno P. Възникваща регулация и функции на автофагията. Nat Cell Biol. 2013; 15 : 713–720. doi: 10.1038/ncb2815. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
11. Levine B. Клетъчна биология: Автофагия и рак. Природата. 2007 г .; 446 : 745–747. doi: 10.1038/446745a. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
12. Galluzzi L, Pietrocola F, Bravo-San Pedro JM, Amaravadi RK, Baehrecke EH, Cecconi F, Codogno P, Debnath J, Gewirtz DA, Karantza V, et al. Автофагия при злокачествена трансформация и прогресия на рака. EMBO J. 2015; 34 : 856–880. doi: 10.15252/embj.201490784. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
13. Wasik AM, Grabarek J, Pantovic A, Cieślar-Pobuda A, Asgari HR, Bundgaard-Nielsen C, Rafat M, Dixon IM, Gamivi S, Łos MJ. Препрограмиране и канцерогенеза-паралели и различия. Int Rev Cell Mol Biol. 2014 г .; 308 : 167–203. doi: 10.1016/B978-0-12-800097-7.00005-1. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
14. Sridhar S, Botbol Y, Macian F, Cuervo AM. Автофагия и болест: Винаги две страни на проблема. Дж. Патол. 2012 г .; 226 : 255–273. doi: 10.1002/пътека.3025. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
15. Levy DE, Darnell JE., Jr Stats: Транскрипционен контрол и биологично въздействие. Nat Rev Mol Cell Biol. 2002; 3 : 651–662. doi: 10.1038/nrm909. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
16. Akira S, Nishio Y, Inoue M, Wang XJ, Wei S, Matsusaka T, Yoshida K, Sudo T, Naruto M, Kishimoto T. Молекулно клониране на APRF, нов IFN-стимулиран ген фактор 3 p91-свързан транскрипционен фактор участва в gp130-медиирания сигнален път. Клетка. 1994; 77 : 63–71. doi: 10.1016/0092-8674 (94) 90235-6. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
17. Niu G, Wright KL, Huang M, Song L, Haura E, Turkson J, Zhang S, Wang T, Sinibaldi D, Coppola D, et al. Конститутивната активност на Stat3 регулира експресията на VEGF и туморната ангиогенеза. Онкоген. 2002; 21 : 2000-2008. doi: 10.1038/sj.onc.1205260. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
18. Tong M, Wang J, Jiang N, Pan H, Li D. Връзка между свръхекспресията на p-STAT3 и прогнозата при рак на белия дроб: Систематичен преглед и мета-анализ. PLoS One. 2017 г .; 12 : e0182282. doi: 10.1371/journal.pone.0182282. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
19. You L, Wang Z, Li H, Shou J, Jing Z, Xie J, Sui X, Pan H, Han W. Ролята на STAT3 в автофагията. Автофагия. 2015 г .; 11 : 729–739. doi: 10.1080/15548627.2015.10.1017192. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
20. Guo S, Luo W, Liu L, Pang X, Zhu H, Liu A, Lu J, Ma DL, Leung CH, Wang Y, Chen X. Изокриптотаншинон, STAT3 инхибитор, индуцира апоптоза и автофагия пред смъртта в A549 белодробни ракови клетки. J Цел за наркотици. 2016 г .; 24 : 934–942. doi: 10.3109/1061186X.2016.1157882. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
21. Li S, Liao R, Sheng X, Luo X, Zhang X, Wen X, Zhou J, Peng K. Водороден газ при лечение на рак. Преден Онкол. 2019; 9 : 696. doi: 10.3389/fonc.2019.00696. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
22. Li FY, Zhu SX, Wang ZP, Wang H, Zhao Y, Chen GP. Консумацията на вода, богата на водород, предпазва от индуцирана от железен нитрилотриацетат нефротоксичност и ранни промоционни туморни събития при плъхове. Food Chem Toxicol. 2013; 61 : 248–254. doi: 10.1016/j.fct.2013.10.004. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
23. Zhou P, Lin B, Wang P, Pan T, Wang S, Chen W, Cheng S, Liu S. Лечебният ефект на богата на водород вода върху остри радиационно-индуцирани кожни наранявания при плъхове. J Radiat Res. 2019; 60 : 17–22. doi: 10.1093/jrr/rry074. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
24. Wu Y, Yuan M, Song J, Chen X, Yang H. Водороден газ от лечение на възпаление до терапия на рак. ACS Nano. 2019; 13 : 8505–8511. doi: 10.1021/acsnano.9b05124. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
25. Chen JB, Pan ZB, Du DM, Qian W, Ma YY, Mu F, Xu KC. Газотерапията с водород предизвиква свиване на метастатичен рак на жлъчния мехур: Доклад за случая. Случаи на World J Clin. 2019; 7 : 2065–2074. doi: 10.12998/wjcc.v7.i15.2065. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
26. Liu G, Pei F, Yang F, Li L, Amin AD, Liu S, Buchan JR, Cho WC. Роля на автофагия и апоптоза при недребноклетъчен рак на белия дроб. Int J Mol Sci. 2017 г .; 18 : 367. doi: 10.3390/ijms18020367. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
27. Kroemer G, Mariño G, Levine B. Автофагия и интегрираната реакция на стреса. Mol Cell. 2010 г .; 40 : 280–293. doi: 10.1016/j.molcel.2010.09.023. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
28. Dang S, Yu ZM, Zhang CY, Zheng J, Li KL, Wu Y, Qian LL, Yang ZY, Li XR, Zhang Y, Wang RX. Автофагията насърчава апоптоза на мезенхимни стволови клетки при възпалителна микросреда. Стволови клетки Res Ther. 2015 г .; 6 : 247. doi: 10.1186/s13287-015-0245-4. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
29. Zhang M, Su L, Xiao Z, Liu X, Liu X. Метилжасмонатът индуцира апоптоза и проапоптотична автофагия чрез ROS пътя при човешки недребноклетъчен рак на белия дроб. Am J Cancer Res. 2016 г .; 6 : 187–199. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ]  ]
30. Galluzzi L, Bravo-San Pedro JM, Vitale I, Aaronson SA, Abrams JM, Adam D, Alnemri ES, Altucci L, Andrews D, Annicchiarico-Petruzzelli M, et al. Съществени и допълнителни аспекти на клетъчната смърт: Препоръки на NCCD 2015 Разликата в клетъчната смърт. 2015 г .; 22 : 58–73. doi: 10.1038/cdd.2014.137. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
31. Уайт Е. Ролята на автофагията при рак. J Clin Invest. 2015 г .; 125 : 42–46. doi: 10.1172/JCI73941. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
32. Liang L, Hui K, Hu C, Wen Y, Yang S, Zhu P, Wang L, Xia Y, Qiao Y, Sun W, et al. Инхибирането на автофагията потенцира антиангиогенното свойство на мултикиназния инхибитор анлотиниб чрез JAK2/STAT3/VEGFA сигнализиране в недребноклетъчни ракови клетки на белия дроб. J Exp Clin Cancer Res. 2019; 38 : 71. doi: 10.1186/s13046-019-1093-3. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
33. Ин C, Zhang H, Liu X, Zhang H, Zhang Y, Bai X, Wang L, Li H, Li X, Zhang S, et al. Намаленият MCOLN1 намалява прогресията на недребноклетъчен рак на белия дроб чрез инхибиране на лизозом-автофагия. Cancer Manag Res. 2019; 11 : 8607–8617. doi: 10.2147/CMAR.S216538. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
34. Li Z, Wang Y, Wu L, Dong Y, Zhang J, Chen F, Xie W, Huang J, Lu N. Апуриновата ендонуклеаза 1 насърчава цисплатиновата резистентност на белодробните ракови клетки чрез индуциране на Parkin-медиирана митофагия. Oncol Rep. 2019; 42 : 2245–2254. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ]  ]
35. Fan J, Ren D, Wang J, Liu X, Zhang H, Wu M, Yang G. Bruceine D индуцира апоптоза и автофагия на рак на белия дроб чрез сигналния път ROS/MAPK in vitro и in vivo. Dis клетъчна смърт Dis. 2020 г .; 11 : 126. doi: 10.1038/s41419-020-2317-3. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
36. El-Khattouti A, Selimovic D, Haikel Y, Hassan M. Crosstalk между апоптоза и автофагия: Молекулярни механизми и терапевтични стратегии при рак. J клетъчна смърт. 2013; 6 : 37–55. doi: 10.4137/JCD.S11034. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
37. Торбърн А. Апоптоза и автофагия: Регулаторни връзки между два предполагаемо различни процеса. Апоптоза. 2008 г .; 13 : 1–9. doi: 10.1007/s10495-007-0154-9. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
38. Гупта Н. А., Колачала В. Л., Дзян Р, Абрамовски С, Шеной А, Костърс А, Павулури Н, Анания Ф, Кърк АД. Намаляването на автофагията подобрява хепатоцелуларното увреждане след исхемично-реперфузионно увреждане в миши стеатотичен черен дроб. Am J Physiol Gastrointest Черен дроб Physiol. 2014 г .; 307 : G1088 – G1099. doi: 10.1152/ajpgi.00210.2014. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
39. Guan P, Sun ZM, Luo LF, Zhou J, Yang S, Zhao YS, Yu FY, An JR, Wang N, Ji ES. Водородът предпазва от хронична интермитентна хипоксия, причинена от бъбречна дисфункция, като насърчава автофагията и облекчава апоптозата. Life Sci. 2019; 225 : 46–54. doi: 10.1016/j.lfs.2019.04.005. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
40. Yan M, Yu Y, Mao X, Feng J, Wang Y, Chen H, Xie K, Yu Y. Вдишването на водороден газ отслабва индуцираното от сепсис увреждане на черния дроб по FUNDC1-зависим начин. Int Immunopharmacol. 2019; 71 : 61–67. doi: 10.1016/j.intimp.2019.03.021. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
41. Gao Y, Yang H, Chi J, Xu Q, Zhao L, Yang W, Liu W, Yang W. Водородният газ намалява реперфузионното увреждане на миокардната исхемия, независимо от посткондиционирането при плъхове, като намалява автофагията, предизвикана от ендоплазмен ретикулум. Клетъчен биохимичен физиол. 2017 г .; 43 : 1503–1514. doi: 10.1159/000481974. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
42. Liu Y, Gong W, Yang ZY, Zhou XS, Gong C, Zhang TR, Wei X, Ma D, Ye F, Gao QL. Кверцетин индуцира защитна автофагия и апоптоза чрез ER стрес чрез оста p-STAT3/Bcl-2 при рак на яйчниците. Апоптоза. 2017 г .; 22 : 544–557. doi: 10.1007/s10495-016-1334-2. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
43. Liu K, Ren T, Huang Y, Sun K, Bao X, Wang S, Zheng B, Guo W. Апатиниб насърчава автофагия и апоптоза чрез VEGFR2/STAT3/BCL-2 сигнализиране при остеосаркома. Dis клетъчна смърт Dis. 2017 г .; 8 : e3015. doi: 10.1038/cddis.2017.422. Безплатна статия за PMC ] [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]
44. Bai X, Liu S, Yuan L, Xie Y, Li T, Wang L, Wang X, Zhang T, Qin S, Song G, et al. Богатият на водород физиологичен разтвор медиира неврозащитата чрез регулиране на стреса на ендоплазмения ретикулум и автофагията при хипоксия-исхемия при новородено мозъчно увреждане при мишки. Brain Res. 2016 г .; 1646 : 410–417. doi: 10.1016/j.brainres.2016.06.020. [ PubMed ] [ CrossRef ]  ]